RIPA裂解液：
RIPA裂解液（英語(yǔ)：Radioimmunoprecipitation assay buffer，全稱放射免疫沉淀法緩沖液）是一種用于裂解細(xì)胞或組織的裂解緩沖液，常用于放射性免疫沉淀分析（RIPA）。此緩沖液的變性性能比NP-40裂解液或曲拉通X-100裂解緩沖液更強(qiáng)，因?yàn)樗x子型去垢劑SDS和脫氧膽酸鈉作為破壞核膜，提取核內(nèi)物質(zhì)的活性成分。RIPA緩沖液在實(shí)驗(yàn)時(shí)能提供低的背景，但也會(huì)使激酶變性。
RIPA主要是從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
裂解緩沖液:
50mM Tris-HCl pH7.6 或20mM Hepes pH7.4150-300mM NaCl
1%(w/w)NP-40 (0.5%Triton-X100)5mM EDTA(現(xiàn)加1ml加10ul)臨用前加入蛋白酶抑制劑: Na3VO4
釩酸鈉1mM(75mM-13.3ul/ml)(用0.2mol/L儲(chǔ)存液配制)
PMSF苯甲酰氟1mM(10mg/mlPMSF用量:10ul/ml)或10-20ug/ml Soybean Trypsin inhibitor(加10-20ul) Aprotinin 抑肽酶10ug/ml(10ul/ml)
(Leupeptin 亮肽素10ug/ml未加)Western blotting
給你介紹一個(gè)裂解液:
50mMTris-HCl(PH8.0)緩沖液，含: NaCl150mM疊氮鈉 0.02% SDS 0.1% NP-40 1%
PMSF 100ug/ml(使用前臨時(shí)加入)(10mg/mlPMSF用量:10ul/ml)盡量用少的裂解液裂解細(xì)胞，取上清電泳，最好用6xSDS 上樣buffer。
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